Klinikiniai srauto citometro naudojimo būdai
Klinikiniai srauto citometro naudojimo būdai!
1. Įvairių ląstelių (pvz., T ląstelių ir B ląstelių) skaičiavimas.
2. B ląstelių antigenų aptikimas ir kraujodaros piktybinių navikų (leukemijų ir limfomų) klasifikavimas.
3. antigenų aptikimas mieloidinių ląstelių paviršiuje, kuris yra naudingas diagnozuojant mielodisplastinius sindromus ir mieloidinę leukemiją.
4. CD34 molekulės ekspresuojamos ant kraujodaros kamieninių kamieninių ląstelių paviršiaus. Kamieninės ląstelės, išskirtos iš kaulų čiulpų ar periferinio kraujo, išvardytos naudojant žymėtus mAb į CD34, kad būtų galima apskaičiuoti tikslią kamieninių ląstelių skaičių ir perduoti pacientui. Likusios kamieninės ląstelės yra laikomos skystame azotu ir prireikus gali būti perduodamos į tą patį pacientą.
5. HLA fenotipų nustatymas Fluoro chromu pažymėti mAb kiekvienam HLA antigenui yra naudojami prisijungti prie MHC I ir II klasės antigenų ląstelių paviršiuje. Vėliau spalvotos ląstelės analizuojamos (kaip ląstelės praeina kaip viena kolonėlė) srauto citometre.
6. Ląstelinių antigenų aptikimas
Iš pradžių ląstelės yra apdorojamos medžiagomis, dėl kurių ląstelė yra pralaidi, visiškai nesulaužant ląstelės.
↓
Vėliau ląstelės yra apdorojamos švelniais konservantais, kad būtų galima susieti citoplazminius baltymus ir užkirsti kelią jų nutekėjimui iš ląstelės.
↓
Tada ląstelės yra apdorojamos pažymėtomis mAb, nukreiptomis prieš intracelulinius antigenus. Pažymėti mAb patenka į ląsteles ir jungiasi su intraceluliniais antigenais.
↓
Ląstelės perduodamos per srauto citometrą, kad būtų galima įvertinti dažytas ląsteles.
i. Ląstelėje esančio galinio deoksinukleotido transferazės (TdT) nustatymas padeda nustatyti ankstyvuosius B ląstelių piktybinius navikus. TdT yra fermentas, ekspresuotas imunoglobulino geno perskirstymo metu, kuris yra atsakingas už atsitiktinių nukleotidų pridėjimą imunoglobulino segmentų sankryžose. Taigi, TdT ekspresija piktybinėje B ląstelių populiacijoje rodo labai nesubrendusią B ląstelių fenotipą.
ii. Intracelulinės mieloperoksidazės aptikimas padeda klasifikuoti įvairius mieloidinės leukemijos potipius.
7. Ląstelių DNR kiekio analizė. Srauto citometras gali įvertinti genetinės medžiagos kiekį ląstelėje ir nustatyti S fazės frakciją arba aneuploidijos kiekį ląstelių populiacijoje, a. DNR ploidija Normalios ląstelės, kuriose yra dvi chromosomos kopijos, vadinamos diploidinėmis ląstelėmis.
Visos ląstelės (išskyrus kiaušialąsčių ir spermos), kurios nėra diploidinės, laikomos aneuploidais ir gali būti patikimas neoplazijos rodiklis. Daugelis auglio ląstelių turi tam tikrą DNR kiekį. Srautinio citometrinio DNR analizė atliekama permeabilizuotų ląstelių inkubacija fluorescentiniais dažais (pvz., Propidžio jodidu).
Dažai įsijungia į DNR ir fluorescuoja. Fluorescencijos kiekis yra tiesiogiai proporcingas ląstelės DNR kiekiui. Paciento piktybinių navikų chemoterapijos veiksmingumą galima įvertinti taikant ploidišką analizę. Ploidio analizė nustato bendrą branduolinės DNR kiekį atskirose naviko ląstelėse. DNR indeksas yra naviko ląstelės DNR fluorescencijos ir normalios ląstelės DNR fluorescencijos santykis. Normalios diploidinės ląstelės DNR indeksas yra 1. DNR indeksas, didesnis arba mažesnis nei 1, rodo aneuploidinį naviką.
b. DNR ląstelių ciklo analizė:
Ląstelių augimui ir ląstelių augimui įvertinti galima nustatyti ląstelių DNR kiekį įvairiose ląstelių ciklo fazėse replikacijos metu (ty Gq / Gj fazės prieš DNR sintezės fazę; S fazės DNR sintezę; G2 / M fazės-po DNR sintezės fazę). vėžio agresyvumas. Daugiau DNR sintezuoja agresyvios vėžio ląstelės. S fazėje vykstančios ląstelės rodo DNR sintezę, kuri yra tiesiogiai proporcinga jų agresyvumui.
8. Daugelis leukocitų funkcinių tyrimų gali būti atliekami srauto citometru.
i. O2 - (superoksido) gamyba kaip lėtinės granulomatinės ligos tyrimas.
9. Ląstelių gyvybingumo nustatymas:
Dažų propidžio jodidas patenka į ląsteles, kuriose yra pažeistos membranos ir sutrikusi branduolinė struktūra. Todėl, su propidio jodidu, negyvos ląstelės fluorescuos, o gyvos ląstelės nėra fluoresuojamos. Be to, propidžio jodido fluorescencija yra toli raudonoje spektro dalyje. Todėl šis metodas gali būti derinamas su reguliariu mAb dažymu, kur negyvos ląstelės yra nudažytos raudonai ir todėl gali būti praleistos duomenų analizėje.
10. Taip pat galima gauti srauto citometrinius metodus, skirtus aptikti apoptozės ląsteles.
