Antigeno arba antikūnų imunodifuzija

Antigeno arba antikūnų imunodifuzija!

Imunodifuzija reiškia antigeno arba antikūno arba abiejų antigenų ir antikūnų molekulių judėjimą palaikomojoje terpėje difuzijos būdu.

Antigenas ir antikūnas jungiasi vienas su kitu ir sudaro netirpias imunines nuosėdas, kurios matomos plika akimi kaip nuosėdų juosta ar linija. J. Oudinas aprašė vienintelio antigeno ir antikūno difuzijos sistemą užpildytuose agaruose.

Netrukus Ouchterlony aprašė dvigubą difuziją agare, sluoksniuotą ant skaidres. Judėjimas taip pat apibūdinamas kaip linijinis arba radialinis. Imunodifuzijos metodai naudojami kokybiniam ir kiekybiniam serumo baltymų tyrimui. Tačiau jautresni ir specifiškesni metodai, tokie kaip imunofermento fermento tyrimas (ELISA) ir radijo imunologinis tyrimas (RIA), beveik pakeitė imunodifuzijos metodus.

Vienkartinė imunodifuzija:

Antigenas arba antikūnas lieka fiksuoti, o kiti reaguoja (Oudino difuzijos metodas).

Dviguba imunodifuzija:

Ir antigenas, ir antikūnas gali laisvai judėti vienas į kitą. (Ouchterlony technika).

Išlydytas agaras pilamas į stiklinę stiklinę arba petridish ir leidžiama sukietėti. Išskleidžiami du nedideli šuliniai, kurių atstumas yra keli milimetrai. Antigenai ir atitinkami antikūnų tirpalai nuleidžiami į priešingus šulinius. Tada slydimas / petridish laikomas drėgnoje kameroje 18–24 valandas. Antigenas ir antikūnas pereina per agarą ir sujungia, kad susidarytų antigeno-antikūno kompleksas. Antigeno-antikūno kompleksas matomas kaip nuosėdų linija.

Dvigubai difuzija taip pat atliekama, lyginamuoju tikslu skirtingais kampais dedant antigenus ir antikūnus. Trys šių reakcijų modeliai parodyti 27.2 pav.

i. Tapatybės reakcija:

Antigenai dviejose duobutėse yra identiški (Agl ir Ag2). Taigi reakcija su antikūnu sukelia tiksliai panašias nuosėdų linijas. Nuosėdų linijos neužkerta, bet sudaro nuolatinę liniją. Dviejų nuosėdų linijų suliejimas rodo, kad antikūnas reaguoja su epitopais, paprastai esančiais ant dviejų antigenų.

ii. Neidentifikacijos reakcija:

Dviejuose identiškuose antigenuose (Agl ir Ag3) yra antigenų šulinėlių, o antikūnų šulinėliuose yra antikūnų prieš abu antigenus. Dvi suformuotos antigenų-antikūnų linijos skiriasi viena nuo kitos. Taigi abi nuosėdų linijos viena nuo kitos visiškai kerta (susikerta).

iii. Dalinės tapatybės reakcija:

Dviejų šulinių antigenų antigeniniai determinantai dalinai dalijami (Agl ir Agla). Todėl antikūnas reaguoja su abiem antigenais ir sudaro linijas, kurios nesudaro viso kryžiaus. Nusodinimo linija kerta tik viena kryptimi. Išplėstinė nuosėdų linija vadinama spurtu. Spurga rodo, kad antikūnas taip pat nusodina papildomą epitopą, kuris nėra viename iš antigenų.

Dvigubą imunodifuziją taip pat galima naudoti pusiau kiekybinei antigeno arba antikūno analizei (27.3 pav.):

27.3 pav.

Dviguba imunodifuzija pusiau kiekybinei antigeno analizei. Antikūnas yra patalpinamas į centrinę šulinėlį, o antigenas periferiniuose šulinėliuose dedamas skirtingose ​​koncentracijose

i. Antigeno kiekybinis nustatymas:

Antigenas X yra nuosekliai praskiedžiamas ir dedamas į šulinius, supančius centrinį šulinį, į kurį dedamas anti-X antikūnas. Antigenas ir antikūnas išsiskiria iš šulinėlių ir reaguoja tarpusavyje, todėl tarp antigeno ir antikūnų šulinių susidaro nuosėdų linijos. Antigenų-antikūnų nuosėdų kiekis mažėja mažėjant antigenų kiekiui įvairiuose šuliniuose. Todėl, sumažėjus antigenų koncentracijai, nuosėdų linijų storis mažėja.

ii. Antikūno kiekio nustatymas:

Naudojama analogiška antigeno kiekio nustatymo procedūra, išskyrus tai, kad pasikeičia antigeno ir antikūno padėtis. Antigenas dedamas į centrinę duobę ir antikūnai skirtinguose skiedimuose dedami į išorinius šulinius.

Vienos radialinės imunodifuzijos:

Mancini pristatė šį naują metodą tiksliam antigenų kiekybiniam nustatymui. Antikūnas maišomas su išlydytu agaru ir supilamas į Petri lėkštelę. Po agaro kietėjimo, šuliniai supjaustomi ir užpildomi skirtingomis antigeno koncentracijomis (27.4 pav.).

Antigenas išsisklaido iš šulinio ir sudaro 48–72 valandas antigeno-antikūno komplekso nuosėdas. Nuosėdos laikomos baltomis apskritomis linijomis aplink kiekvieną šulinėlį. Apskritojo žiedo skersmuo yra tiesiogiai proporcingas antigeno koncentracijai (ty, daugiau antigeno koncentracijos, nuosėdų skersmuo yra didesnis).

Standartinė kreivė gali būti pavaizduota grafikos lape, brėžiant žinomas antigeno koncentracijas X ašyje ir skersmenis Y ašyje. Bandomasis antigenas, kurio koncentracija nežinoma, gali būti nustatoma interpoliuojant standartinę kreivę su bandomosios antigeno sukauptos nuosėdos skersmeniu.

Šio metodo jautrumas yra 1-3 µg / ml antigeno. Šis metodas naudojamas IgG, IgM arba IgA koncentracijų kiekybiniam įvertinimui (įtraukiant atitinkamai į agaro anti-IgG, anti-IgM arba anti-IgA antiserius).