Kaip atlikti bakterijų kapsulės dažymą

Tikslas atlikti bakterijų dažymą kapsulėmis, stebėti bakterijų kapsulę.

Tikslas:

Kai kuriose bakterijose ląstelių sienelę supa klampus ląstelių apvalkalas, vadinamas „kapsulė“. Jis gaminamas iš polisacharido, glikoproteino arba polipeptido.

Kai kapsulė yra per plona, kad ją būtų galima stebėti šviesos mikroskopu, ji vadinama „mikrokapsulė“ ir, kai ji yra tokia stora, kad daugelis ląstelių yra įdėtos į kapsulę; tai vadinama „gleivine“.

Remiantis kapsulės buvimu ar nebuvimu, bakterijos yra dviejų rūšių:

(1) Kapsulinės bakterijos:

Bakterijos, turinčios kapsulę, yra kapsuluotos bakterijos.

(2) Bakterijos be kapsulių:

Bakterijos, neturinčios kapsulės, yra nekapsuluotos bakterijos

Kapsulių dažymo tikslas yra stebėti bakterijų kapsulę, atskiriant kapsulinę medžiagą nuo bakterijų ląstelės.

Principas:

Kapsulių dažymo metu, blykstės tepinėlis yra skaidrės centre. Jis nėra šildomas, nes ląstelių susitraukimas, kurį sukelia šildymas, gali sukurti aiškią zoną aplink ląstelę, kuri gali būti klaidinga kaip kapsulė.

Be to, kadangi kapsulinė medžiaga yra vandenyje tirpsta ir gali būti plaunama stipriame plovime, dažymui naudojami tik du reagentai be jokio vandens plovimo. Vienas iš dviejų reagentų yra pirminis dažymas, kristalinė violetinė. Ji suteikia tamsiai violetinės ir mėlynos spalvos tiek ląstelei, tiek kapsulei.

Tačiau ji yra „absorbuojama“ į ląstelę dėl ląstelių komponentų jonų pobūdžio, o ji paprasčiausiai „prilimpa“ prie kapsulės dėl nejoninės kapsulės medžiagos pobūdžio. Siekiant išvengti kapsulinės medžiagos nutekėjimo, tepalas nėra nuplaunamas vandeniu.

Antrasis reagentas, vario sulfatas veikia tiek kaip spalvos mažinimo agentas, tiek priešprieša. Jis išnyksta, pašalindamas perteklių kristalinį violetą iš ląstelių, taip pat į kapsulę prilipusį kristalų violetą. Ji taip pat kontrastuoja kapsulę ir suteikia jai šviesią mėlyną spalvą. Dabar kapsulė atrodo šviesiai mėlyna, o ląstelė atrodo giliai violetinė.

Reikalingos medžiagos:

Pristatymas, kilpa, panardinamoji alyva, mikroskopas, kristalinės violetinės dėmės, vario sulfato tirpalas (20%).

Procedūra:

1. Slankiklis tinkamai išvalomas po vandentiekio vandeniu, kad vanduo neišliktų ant jo paviršiaus (5.14 pav.).

2. Prilipęs vanduo nuvalomas bibuliuojančiu popieriumi ir skaidrė džiovinama oru.

3. Bakterijų tepinėlis paruošiamas skaidrių centre dviem būdais, kaip nurodyta toliau.

(a) Jei reikia stebėti agaro plokštelėje arba agaro sluoksnyje išaugintas bakterijas, į stiklelio centrą įdedamas vandens lašas, o ant plokštelės arba nuo šlaito bakterijų kilpa perduodama per liepsnos sterilizuotą kilpą. Tada, lėtai sukant ciklą laše, gaminama bakterijų suspensija ir pasklinda, kol gaunamas tepalas.

(b) Jei reikia laikytis skysto sultinio auginamos bakterijos, bakterijų suspensijos lašas tiesiogiai įstumiamas į stiklelio centrą, naudojant liepsnos sterilizuotą kilpą.

4. Tepalas išdžiovinamas ore. Nėra šilumos fiksavimo, nes dėl to ląstelių susitraukimas gali sukelti aiškią zoną aplink bakterijas, kurios gali būti klaidingos kaip kapsulė.

5. Tepalas yra užtvindytas nuo pirminės dėmės, kristalinės violetinės, 5-7 minutes.

6. Tepalas plaunamas 20% vario sulfato tirpalu. Siekiant išvengti kapsulinės medžiagos nutekėjimo, tepalas nėra nuplaunamas vandeniu.

7. Skaidrių popierius nuvalomas sausu popieriumi.

8. Slankiklis yra nukirptas į mikroskopo stadiją, o tepinėlis stebimas esant mažai galiai ir labai sausiems tikslams.

9. Į tepinėlį įpilama panardinimo alyvos lašelis.

10. Tepalas stebimas pagal naftos panardinimo tikslą.