Eksperimentas atliekant bakterijų rūgštingumą greitai

Eksperimentuokite, kad bakterijos būtų greitai rūgštingos, kad išsiaiškintumėte, ar jis yra greitai rūgštus ar rūgštingas!

Tikslas:

Dauguma bakterijų gali būti nudažytos paprastu pagrindiniu dažymu arba dažymo būdu gramais, nes jų ląstelės lengvai nusidažo.

Tačiau kai kurios bakterijos turi storą vaško ląstelių sienelę, pagamintą iš lipidinių medžiagų.

Tokias bakterijas yra labai sunku nudažyti, nes paprastos vandeninės dėmės negali lengvai patekti į jų ląsteles, bet kai jos yra dažytos; lygiai taip pat sunku pašalinti dėmę iš savo ląstelių, net ir intensyviai naudojant rūgštį-alkoholį kaip spalvą šalinančią medžiagą. Šios bakterijos dažomos greitai rūgštimi.

Taigi, greitas dažymas rūgštimi, panašus į gramų dažymą, yra diferencinio dažymo metodas, kuris bakterijas diferencijuoja pagal savo ląstelių sienelės pobūdį į dvi grupes:

(1) Greitas bakterijų rūgštis:

Bakterijos, kurios yra labai sunku nudažyti, bet kai dažytos, taip pat sunku pašalinti dėmę iš savo ląstelių, net ir aktyviai naudojant rūgštį-alkoholį kaip spalvą palengvinančią medžiagą, yra rūgščiai greitai bakterijos (rūgštimi mylintis). bakterijos).

Pavyzdžiai: Mycobacterium spp. [M. tuberkuliozė (TB bakterijos), M. leprae (raupsų bakterijos), M. smegmatis (natūralios smegmos bakterijos) ir M. marinum (jūrų žuvų bakterijos). Jie turi storą vaško ląstelių sienelę, pagamintą iš lipidinių medžiagų.

(2) Bakterijos, kurios nėra rūgštinės, :

Bakterijos, kurios yra lengvai nudažomos ir kurios taip pat lengvai nudažomos rūgšties-alkoholio pavidalu, yra bakterijos be rūgščių (ne rūgščių mylinčios bakterijos). Pavyzdžiai: Visos bakterijos, išskyrus Mycobacterium spp. Šiose bakterijose ląstelių sienelės nėra storos ir vaškuotos.

Rūgštinis dažymas yra naudingas diferencijuoti rūgštingoms ir ne rūgštingoms bakterijoms, taip pat identifikuoti Mycobacterium genties bakterijas.

Principas:

Greitai bakterijos rūgšties požiūriu skiriasi nuo bakterijų, kurios nėra rūgštinės, todėl jos turi storą vaško ląstelių sienelę, pagamintą iš lipidinių medžiagų. Įprastos vandeninės dėmės, tokios kaip metileno mėlyna arba kristalinė violetinė, negali patekti į jų ląsteles per šią vaškinę ląstelių sienelę.

Tačiau raudonos spalvos fenolio pirminis dažymas karbolio fuksinas (karbolio rūgštis arba fenolio + bazinis fuchinas); kuris tirpsta ląstelių sienelių lipidinėse medžiagose, gali patekti į jų ląsteles per ląstelės sienelę ir gali būti išlaikytas ląstelių viduje, suteikiančias jiems raudoną spalvą.

Tolesnis įsiskverbimas dar padidinamas naudojant šilumą, kuris per lipoidinę sienelę perkelia karbolio fuksiną į citoplazmą. (Nedidelė šio Ziel-Neelsen metodo modifikacija apibūdina drėkinamosios medžiagos Turgitol pridėjimą prie dėmės, kuri sumažina paviršiaus įtampą tarp ląstelės sienelės ir dėmės, todėl nereikia šildymo). Ląstelėms leidžiama atvėsti, kad sukietėtų vaško ląstelių sienelę.

Kai ląstelės yra veikiamos skilimo agentu, rūgštiniu alkoholiu, jos priešinasi dekoliacizacijai, nes pirminė dėmė yra labiau tirpsta ląstelių vaškuose nei išgaruojančiame agente. Vėliau, kai prieš tai dažomas metileno mėlynas, jis negali patekti į ląsteles per vaškuotos ląstelės sienelę.

Taigi, pagaliau rūgštinės bakterijos išlaiko pirminės dėmės raudoną spalvą ir atrodo raudonos. Kita vertus, greitai rūgštinės bakterijos lengvai įsisavina pirminę dėmę ir lengvai nyksta. Kai bespalvis metileno mėlynas, šios bespalvės ląstelės taip pat lengvai užima priešpriešą ir atrodo mėlynos spalvos, priešingai nei rūgštinės bakterijos, kurios atrodo raudonos.

Reikalingos medžiagos:

Pristatymas, kilpa, pirminė dėmė (karbolio fuksinas), spalvos šalinimo medžiaga (rūgštis-alkoholis), priešpriešinė (metileno mėlyna), karštoji plokštelė, sultinio / šlaito / plokščių bakterijų kultūra, mikroskopas, panardinimo alyva.

Procedūra:

1. Slankiklis tinkamai išvalomas po vandentiekio vandeniu, kad vanduo neišliktų ant jo paviršiaus (5.12 pav.).

2. Prilipęs vanduo nuvalomas bibuliuojančiu popieriumi ir skaidrė džiovinama oru.

3. Bakterijų tepinėlis paruošiamas skaidrių centre dviem būdais, kaip nurodyta toliau.

a) Jei reikia laikytis agaro plokštelėje arba agaro sluoksnyje auginamų bakterijų, į stiklelio centrą įdedamas vandens lašas, o bakterijų kilpa iš plokštelės ar nuožulnios juostos perkeliama į jį liepsnos, sterilizuotos per liepsną . Tada, lėtai sukant ciklą laše, gaminama bakterijų suspensija ir pasklinda, kol gaunamas tepalas.

b) Jei reikia laikytis skysto sultinio auginamos bakterijos, bakterijų suspensijos lašas tiesiogiai įstumiamas į stiklelio centrą, naudojant liepsnos sterilizuotą kilpą, ir išplaunama.

4. Tepalas išdžiovinamas ore.

5. Tepalas tvirtinamas kaitinant. Šildymas sukelia ląstelių baltymų koaguliaciją, dėl to ląstelės prilimpa prie slydimo paviršiaus ir negauna plovimo dažymo metu. Šilumos fiksavimas atliekamas greitai perstumiant aukščiau virš liepsnos 2-3 kartus, o tepinėlio paviršius yra nukreiptas į viršų, kad tepinėlis nebūtų pašildomas.

6. Tepalas yra užtvindytas karbolio fuksinu

7. Stiklelis dedamas ant šiltos karštos plokštelės, leidžiant preparatui garuoti 5 minutes. Karštosios plokštės temperatūra yra sureguliuota taip, kad preparatas nevirtų ir greitai išgaruotų. Garavimo nuostoliai papildomi taip, kad tepalas neišdžiūtų. (Šiluminis metodas 3–5 min. Užliejamas Turgitolio turinčiu karbolio fuksinu).

8. Slankiklis išimamas iš karštojo plokštės ir atvėsinamas.

9. Pernelyg didelis dažų sluoksnis nuplaunamas nuo tepinėlės švelniai tekančiu vandentiekio vandeniu taip, kad vanduo nepatektų tiesiai į tepinėlį.

10. Į tepinėlį lašai pridedama dažančioji medžiaga, rūgštis-alkoholis, kol karbolio fuksinas neplautas nuo tepinėlės.

11. Alkoholio rūgštis nuplaunama nuo tepinėlės švelniai tekančiu vandentiekio vandeniu taip, kad vanduo nepatektų tiesiai į tepinėlį.

12. Tepinėlis užtvindytas priešpriešiniu dažikliu (metileno mėlyna) 2 minutes.

13. Pernelyg didelis priešpriešas nuplaunamas nuo tepinėlio švelniai tekančiu vandentiekio vandeniu taip, kad vanduo nepatektų tiesiai į tepinėlį.

14. Skaidriui išdžiovinamas bibulinis popierius.

15. Slankiklis yra nukirptas į mikroskopo etapą, o tepinėlis stebimas esant mažai galiai ir dideliems sausiems tikslams.

16. Į tepinėlį įpilama panardinimo alyvos lašelis.

17. Tepalas pastebimas pagal naftos panardinimo tikslą.