Antigeno ir antikūno elektrimunodifuzijos metodų metodai
Imunodifuzijos metoduose antigenui ir antikūnui leidžiama pasklisti, kad susidarytų nuosėdų linija, ir tai užtrunka ilgiau (24–72 val.).
Jei antigeno ir (arba) antikūno judėjimas yra greitesnis, nuosėdų linija susidarys per labai trumpą laiką, kad būtų galima greitai nustatyti diagnozę. Šis tikslas pasiekiamas elektriniu būdu perkeliant antigeną ir antikūną. Yra daug šio principo variantų. Du bendrieji metodai yra priešinės srovės imunoelektroforezė ir Laurell raketų elektroforezė.
Priešinės srovės imunelektroforezė (dvimatė dviguba elektrimunodifuzija):
Ant disko ant agaro supjaustomi du šuliniai.
↓
Viena šulinė užpildyta antigenu, o kita duobutė užpildyta antikūnu.
↓
Agaro antikūnų pusė yra prijungta prie anodo ir antigeno pusė yra prijungta prie elektroforezės aparato katodo.
↓
Taikant elektros energiją, antigenas ir antikūnų molekulės (dėl savo elektrinių įkrovimų) juda agare esant elektrinei įtampai.
Šarminiame buferyje daugelis kliniškai svarbių antigenų yra elektroniniai, todėl jie pereina prie anodo (ty ant antikūno šulinio). Antikūnų molekulės yra elektra neutralios arba silpnai neigiamos. Paprastai elektriškai neigiamos antikūnų molekulės turėtų judėti link anodo.
Bet hidroneumo jonų judėjimas agare elektroforezės metu yra labai stiprus ir traukia silpnai neigiamas antikūnų molekules link katodo (ty į antigeno šulinį). Kadangi antigenų ir antikūnų molekulės juda priešingomis kryptimis, jos susitinka viena su kita ir sudaro nuosėdų liniją tarp dviejų šulinių. Nusodinimo linija matoma per 30 minučių (priešingai nei 24 val. Difuzijos metu) ir yra maždaug 10 kartų jautresnė už difuziją.
Antimikrobinė imunoelektroforezė naudojama aptikti
a. Meningokokiniai, kriptokokiniai ir hemofiliniai antigenai smegenų skystyje ir
b. B hepatito paviršiaus antigenas serume.
Laureno raketų elektroforezė (viena dimensija vienintelė elektrimunodifuzija):
Šis metodas naudojamas antigenams kiekybiškai nustatyti. Antikūnas yra sumaišomas su išlydytu agaru ir supilamas ant stiklo. Po sukietėjimo duobutės supjaustomos ir užpildomos skirtingomis antigeno koncentracijomis.
↓
Kai naudojama elektros energija, antigenas patenka į agarą turinčius antikūnus. Prokipitino linijos yra suformuotos išilgai antigeno judančios ribos šoninių ribų. Palaipsniui antigenas prarandamas kritulių būdu, todėl jo koncentracija priekiniame krašte mažėja ir šoninės paraštės susilieja, kad susidarytų aštrus taškas. Taigi gautas kritulių modelis panašus į smaigalį ar raketą.
Spyglio atstumas nuo antigeno gerai didėja, didėjant antigenų koncentracijai. Standartinę kreivę galima nustatyti naudojant žinomas antigenų koncentracijas. Tiriamojo antigeno koncentracija gali būti nustatyta interpoliuojant standartinę kreivę su raketos atstumu.
Šio metodo jautrumas yra maždaug 0, 5 mg / ml. Laurell technika taip pat naudojama nustatyti cryptococcus, meningococcus ir hemophilus antigenus smegenų skystyje (CSF).
