Imunohistocheminių tyrimų metodai, skirti aptikti naviko antigenus

Imunohistocheminiai tyrimai plačiai naudojami aptikti naviko antigenus ir klasifikuoti limfocitų ląstelių tipus chirurginės patologijos skyriuose.

Audinio mėginys tvirtinamas ant stiklo stiklo.

↓

Fermentais pažymėtas mAb (konjugatas) padengiamas ant mėginio ir inkubuojamas.

i. Jei mėginys turi specifinį antigeną prieš mAb, konjugatas jungiasi prie mėginio antigeno.

↓

Po plovimo pridedama substrato ir inkubuojama.

i. Spalvos raida reiškia, kad audinių skyriuje yra specifinis antigenas prieš mAb.

ii. Nesant specifinio antigeno, spalvų išsivystymo nėra.

↓

Stiklelis plaunamas ir audinio sekcija matoma po mikroskopu spalvos buvimui.

Krienų peroksidazė (HRP) yra fermentas, paprastai naudojamas imunohistocheminiuose metoduose. HRP substratas yra vandenilio peroksidas ir diamino-benzidinas. HRP reakcija su diaminobenzidinu sukuria juodą spalvą.

Peroksidazė-antiperoksidazė (PAP) yra dar vienas chirurginės patologijos metodas, skirtas fermentų ir su vėžiu susijusių antigenų aptikimui.

Tai trijų etapų metodas:

1 žingsnis:

Audinys, įtariamas tam tikru antigenu, yra pritvirtintas prie stiklo stiklo.

↓

Žinomas triušio antikūnas prieš aptariamą antigeną nukrenta ant audinio (įtariamai turi antigeną), pritvirtinto prie stiklo stiklo.

i. Jei atitinkamas antigenas yra audinyje, antikūnas prisijungia prie jo. Skaidrus plaunamas po inkubacijos.

↓

2 žingsnis:

Ant stiklelio nukrenta anti-triušio imunoglobulinas (vadinamas nuorodos antikūnu).

i. Jei pirmasis triušio antikūnas atsitinka slankoje (prijungtas prie antigeno), anti-triušio imunoglobulinas prisijungia prie triušio antikūno. Po inkubacijos stiklelis plaunamas.

↓

3 žingsniai:

Imuninis kompleksas, sudarytas iš triušių antikūnų prieš peroksidazę, kartu su peroksidaze, yra nuleistas. Šis triušio antikūnas prisijungs prie anti-triušio imunoglobino (jungties antikūnas-2 etapas) per savo Fc regioną. Po inkubacijos stiklelis plaunamas.

↓

Galiausiai pridedamas peroksidazės substratas. Substratas reaguoja su peroksidaze, todėl susidaro spalvotas produktas, matomas mikroskopu.

i. Spalvoto produkto buvimas ant audinio rodo atitinkamo antigeno buvimą.

ii. Spalvoto produkto nebuvimas ant skaidrių rodo, kad aptariamas antigenas nėra audinyje.