Biologiniai narkotikų vertinimo metodai

Kai fiziniai ar cheminiai įvertinimo metodai arba mėginio kiekis yra labai mažai, jie nesugeba gauti tinkamų rezultatų vaistuose, todėl vaistai vertinami biologiniais vertinimo metodais. Šie metodai atliekami su gyvais gyvūnais, izoliuojant gyvus organus ir audinius, gyvūnų paruošimą ir mikroorganizmą. Biologiniai vertinimo metodai atliekami su gyvu organizmu, vadinamu biologiniu tyrimu arba biologiniu tyrimu.

Šis metodas naudojamas kaip:

1. Vaistų priešuždegiminis aktyvumas

2. Vaistų antipiretinis aktyvumas

3. Antidiabetinis vaistų aktyvumas

4. Vaistų analgetinis aktyvumas

5. Narkotikų antikūnų aktyvumas

6. Anthelmintinis vaisto aktyvumas: jie atliekami ant kirminų

7. Vaisto širdies veikla: širdies glikozidai vertinami varliais ir balandžiais

8. Mikrobiologiniai metodai: gyvos bakterijos, mielės ir pelėsiai naudojami vitaminams nustatyti ir antibiotikų aktyvumui nustatyti.

Vaistų priešuždegiminis aktyvumas:

Pėdų edemos metodas:

Naudojamos patelės arba patelės Sprague-Dawley žiurkės, kurių kūno svoris yra nuo 100 iki 150 g. Gyvūnai naktį badauja. Norint užtikrinti vienodą hidrataciją, žiurkės gauna 5 ml vandens skrandžio vamzdeliu (kontroliniai) arba tiriamasis vaistas ištirpinamas arba suspenduotas tame pačiame tūrio. Praėjus trisdešimčiai minučių žiurkėms buvo įšvirkščiama po oda 0, 05 ml 1% karageno tirpalo ir į kairę užpakalinę koją. Kaklas pažymėtas rašalu šoninio malleolio lygiu ir panardinamas į gyvsidabrį iki šio ženklo.

Pėdos tūris matuojamas plethysmographically iš karto po injekcijos, vėl 3 ir 6 val., O galiausiai po 24 val. Kojų kiekio padidėjimas po 3 arba 6 val. Skaičiuojamas procentais, lyginant su išmatuotu kiekiu po kiekvieno gyvūno dirginimo.

Efektyviai gydyti gyvūnai turi daug mažiau edemos. Vidutinių verčių skirtumas tarp gydytų gyvūnų ir kontrolinių grupių apskaičiuojamas kiekvienam laiko intervalui ir statistiškai įvertinamas. Skirtumai tarp skirtingų laiko intervalų suteikia šiek tiek patarimų dėl priešuždegiminio poveikio trukmės. Veikliųjų vaistų dozės ir atsako kreivė yra nustatoma ir galima nustatyti ED50 reikšmes.

Medvilnės vilnos granulomos metodas:

Vyriškos Wister žiurkės, kurių vidutinis svoris 200 g, anestezuojamos eteriu. Nugaros oda nuskusta ir dezinfekuojama 70% etanoliu. Nugarkaulį atlieka juosmens srityje. Pleiskanomis žnyplėmis suformuojami poodiniai tuneliai ir sterilizuota medvilnės granulė dedama į abiejų pusių apvalkalo regioną.

Granulės yra standartizuotos naudojimui odontologijoje, sveriančioje 20 mg, arba granulės, pagamintos iš žalios medvilnės, kurios sukelia ryškesnį uždegimą nei balinta medvilnė. Gyvūnai gydomi 7 dienas po oda arba per burną.

Tada gyvūnai nužudomi, granulės paruošiamos ir išdžiovinamos, kol svoris išlieka pastovus. Nustatomas grynasis sausasis svoris, ty atėmus medvilnės granulių svorį. Apskaičiuojamas kontrolinės grupės ir bandomosios grupės granulių vidutinis svoris. Nustatomas granulomos svorio procentinis pokytis, palyginti su transporto priemonės kontroline grupe.

Antipiretinis vaisto aktyvumas:

Gali būti naudojami abiejų lyčių triušiai ir įvairūs štamai, kurių kūno svoris yra nuo 3 iki 5 kg. Gyvūnai dedami į tinkamus narvelius ir į tiesiąją žarną patenka termoelementai, sujungti su automatiniu įrašytuvu. Gyvūnams leidžiama prisitaikyti prie narvų 60 min.

Tada į triušio ausį į veną įšvirkščiamas 0, 2 ml / kg, kuriame yra 0, 2 µg lipopolizacharido. Po šešiasdešimties minučių bandomasis junginys yra skiriamas po oda arba per burną. Kūno temperatūra stebima mažiausiai 3 valandas.

Teigiamas efektas laikomas kūno temperatūros mažėjimu mažiausiai 0, 5 ° C temperatūroje daugiau nei 30 min., Palyginti su temperatūros verte prieš pradedant tiriamąjį junginį. Šis rezultatas buvo nustatytas po 45 mg / kg fenilbutazono po oda arba 2, 5 mg / kg po oda indometacino.

Antidiabetinis vaistų aktyvumas:

Streptozotocino sukeltas diabetas:

Vyriškos Wister žiurkės, sveriančios 150-220 g, maitinamos standartine dieta, į veną suleidžiamos 60 mg / kg streptozotocino (Calbiochem). Kaip ir aloksano atveju, stebimi trys gliukozės kiekio kraujyje pokyčiai. Iš pradžių padidėja gliukozės kiekis kraujyje, pasiekus 150-200 mg% po 3 val. Po šešių aštuonių valandų po streptozotocino, serumo insulino vertės padidėja iki 4 kartų, todėl atsiranda hipoglikeminė fazė, po kurios seka nuolatinė hiperglikemija. Diabetinių simptomų sunkumas ir pasireiškimas priklauso nuo streptozotocino dozės.

Po 60 mg / kg dozės į veną. Simptomai pasireiškia jau po 24-48 val., Kai hiperglikemija yra iki 800 mg, gliukozurija ir ketonemija. Histologiškai beta ląstelės yra degranuliuojamos arba net nekrotinės. Pastovi koncentracija pasiekiama po 10-14 dienų, leidžianti naudoti gyvūnus farmakologiniams tyrimams.

Aloksanais sukeltas cukrinis diabetas. Triušiai, sveriantys nuo 2, 0 iki 3, 5 kg, per ausų veną infuzuojami 150 mg / kg aloksano monohidrato (5, 0 g / 100 ml, pH 4, 5) 10 minučių, todėl 70% gyvūnų tampa hiperglikeminiais ir šlapimo takais. Likusieji gyvūnai miršta arba yra tik laikinai hiperglikeminiai.

Analgetinis vaisto aktyvumas:

Karštojo plokštelės metodas:

Kiekvienai dozei skiriamos 10 abiejų lyčių pelių grupės, kurių pradinis svoris yra 18-22 g. Prekyboje esanti kaitinimo plokštelė susideda iš elektriniu būdu šildomo paviršiaus. Temperatūra reguliuojama nuo 55 ° iki 56 ° C. Tai gali būti vario plokštė arba šildomas stiklo paviršius. Gyvūnai dedami ant karštosios plokštelės, o laikas, kol pasireiškia nužudymas ar šokinėjimas, užrašomas stoteliu. Lėtumas registruojamas prieš ir po 20, 60 ir 90 min. Po geriamojo ar poodinio standarto arba tiriamojo junginio vartojimo.

Galinio panardinimo bandymas:

Naudojamos jaunos Wister žiurkės (170-210 g kūno svorio). Jie dedami į atskirus laikančius narvus, paliekant uodegą laisvai. Prieš bandymą gyvūnams leidžiama prisitaikyti prie narvų 30 min. Apatinė 5 cm dalis uodegos yra pažymėta. Ši uodegos dalis panardinama į taurę šviežiai užpildyto vandens, tiksliai 55 ° C. Per kelias sekundes žiurkė reaguoja ištraukdama uodegą. Reakcijos laikas įrašomas 0, 5 s vienetais chronometru. Po kiekvieno nustatymo uodega kruopščiai išdžiovinama.

Reakcijos laikas nustatomas prieš tiriamąją medžiagą per burną arba po oda, pvz., Po 0, 5, 1, 2, 3, 4 ir 6 val. Panardinimo laikas yra 15 s. Neapdorotų gyvūnų pašalinimo laikas yra nuo 1 iki 5, 5 s. Todėl teigiamas atsakas laikomas ilgesniu nei 6 s nutraukimo laiku.

„Heffner“ uodegos klipų metodas:

Arterijos klipas taikomas pelių uodegos šaknims ir pastebimas reakcijos laikas. Naudojamos vyriškos pelės (Charles River kamienas arba kiti padermės), kurių svoris yra nuo 18 iki 25 g. Kontrolinę grupę sudaro 10 pelių. Bandomieji junginiai yra švirkščiami į poodį arba švirkščiamiems gyvūnams. Tyrimo grupės ir kontrolinė grupė susideda iš 7-10 pelių.

Vaistas skiriamas 15, 30 arba 60 min. Arterijos gnybtas taikomas uodegos šaknims (maždaug 1 cm atstumu nuo kūno), kad sukeltų skausmą. Gyvūnas greitai reaguoja į šį kenksmingą stimulą kramtydamas klipą ar uodegą netoli klipo vietos. Laikas tarp stimuliacijos pradžios ir atsako matuojamas chronometru 1/10 sekundžių intervalais.

Antiuliatoriaus veikla :

„Pylorus“ ligojimas žiurkėms („Shay Rat“):

Moteriškos Wister žiurkės, sveriančios 150-170 g, yra bado 48 val., Turinčios prieigą prie geriamojo vandens. Per tą laiką jie yra laikomi vienkartiniuose narvuose, kuriuose yra padidintos plačios vielos tinklo dugnai, kad būtų išvengta kanibalizmo ir nesėkmės. Vieną dozę ir kontrolinį preparatą vartoja dešimt gyvūnų. Eterio anestezijos metu atliekamas vidurinės linijos pilvo pjūvis. Pylorus yra teisėtas, rūpestingas, kad nei kraujo žala.

Pylorui nėra tiekimo ar traukos. Reikia vengti kruopščiai vengti skrandžio su instrumentais; kitaip tokiuose taškuose visada atsiras opos. Pilvo siena uždaryta siūlais. Bandomieji junginiai yra duodami arba per burną, arba įšvirkščiami po oda.

Gyvūnai 19 valandų dedami į plastikinius cilindrus, kurių vidinis skersmuo 45 mm uždaromi abiejuose galuose vieliniu tinklu. Po to gyvūnai nužudomi CO ₂ anestezijoje. Pilvas yra atidarytas ir aplink stemplę, esančią netoli diafragmos, pritvirtinama ligatūra.

Skrandis pašalinamas, o turinys išleidžiamas centrifugos mėgintuvėlyje. Kartu su didesniu kreivumu skrandis atidaromas ir pritvirtinamas ant kamštienos plokštės. Gleivinė tiriama su stereo mikroskopu. Žiurkėms viršutinės dvi skrandžio penktosios sudaro skrandžio epitelią ir turi mažai apsauginių mechanizmų prieš skrandžio sulčių koroziją.

Žemiau ribojančio kraigo, skrandžio liaukos dalyje, apsauginiai mechanizmai yra geresni vidutiniškai dviejų penktadalių skrandžio gleivinėje nei žemiausioje dalyje, sudarančioje antrumą.

Todėl pažeidimai atsiranda daugiausia prieskrandyje ir antrumoje. Yra pastebėtas opų skaičius ir sunkumas registruojamas taip:

. 0 = nėra opos

. 1 = paviršinės opos

. 2 = gilios opos

. 3 = perforacija.

Išmatuotas skrandžio kiekis. Po centrifugavimo rūgštingumas nustatomas titruojant 0, 1 n NaOH.

Vertinimas:

Apskaičiuota opos indekso UI:

UI = UN + US + UP x 10-1

i. JT = opų vidurkis vienam gyvūnui

ii. JAV = vidutinis sunkumo balas

iii. UP = opų procentas

Gydomųjų gyvūnų skrandžio kiekio ir skrandžio kiekio indeksas lyginamas su kontroliniais tyrimais. Naudojant įvairias dozes, gali būti nustatytos dozės ir atsako kreivės opų formavimui ir skrandžio rūgšties sekrecijai. ID50 reikšmes galima apskaičiuoti tikimybės analize, pagal kurią 0% atitinka didžiausią stimuliuojamą skrandžio rūgšties produkciją ir 100%.

Streso opa imobilizacijos metu:

Naudojamos 10 patelių Wister žiurkių grupės, skirtos tiriamojo vaisto dozei ir kontrolei, sveriančiai 150-170 g. Maistas ir vanduo prieš bandymą ištraukiami 24 val. Po geriamojo ar poodinio tiriamojo junginio arba placebo tirpalo gyvūnai šiek tiek anestezuojami eteriu.

Apatinės ir viršutinės galūnės yra pritvirtintos kartu ir gyvūnai suvynioti į vielos žvilgsnį. Jie yra horizontaliai suspenduoti tamsoje 20 ° C temperatūroje 24 val., O galiausiai jie nužudomi CO ₂ anestezijoje. Skrandis pašalinamas, tvirtinamas ant kamštienos plokštelės, o opų skaičius ir sunkumas registruojamas stereomikroskopu, naudojant šiuos balus:

.0 = nėra opos

.1 = paviršinės opos

.2 = gilios opos.

.3 = perforacija

Vertinimas

Apskaičiuota opos indekso UI:

UI = UN + US + UP x 10-1

JT - vidutinis opų skaičius vienam gyvūnui.

JAV = vidutinis sunkumo balas.

UP - gyvūnų, turinčių opų, procentas