3 Agliutinacijos metodų klasifikacija

Trys tipai, į kuriuos klasifikuojami ląstelių agliutinacijos metodai, yra: 1. tiesioginė agliutinacija, 2. netiesioginė (pasyvi) agliutinacija ir 3. atvirkštinė (pasyvi) agliutinacija.

1. Tiesioginis agliutinacijos testas:

Ląstelės (pvz., Bakterijos, grybai ir eritrocitai) ir netirpūs kietųjų dalelių antigenai gali būti tiesiogiai agliutinuojami pagal jų specifinius antikūnus. Antikūnas turi dvi Fab rankas, su kuriomis jis gali prisijungti prie antigenų dviejose ląstelėse. Taip pat daug antikūnų molekulių jungiasi su daugeliu ląstelių, kad suformuotų groteles.

Šis grotelių susidarymas vizualiai matomas kaip gumbai. Taigi, gumulėlių susidarymas rodo, kad yra antigenų-antikūnų. Agliutinacijos trūkumas rodo, kad nėra antigenų-antikūnų reakcijos.

Tiesioginio agliutinacijos testo panaudojimas:

a. Mikrobų identifikavimas:

Bakterijų kolonijos, auginamos auginimo terpėse, yra identifikuojamos naudojant žinomus antiserumus prieš mikrobus. Antimikrobinis antiserumas, kuris sukuria matomą agliutinaciją, identifikuoja bakterijas.

b. Mikrobinių infekcijų diagnostika, nustatant antikūnų buvimą mikrobuose serume. Žinomi mikrobų antigenai yra sumaišyti su paciento serumu ir agliutinacijos pasireiškimas rodo, kad yra antikūnų prieš mikrobą.

c. Žmogaus eritrocitų ABO kraujo grupė (naudojant antiserumus).

Agliutinacijos bandymai atliekami ant stiklelio (stiklelio agliutinacijos bandymo) arba mėgintuvėliuose (mėgintuvėlių agliutinacijos bandymas).

i. Skaidrių agliutinacijos testas yra paprastas ir paprastas, todėl bandymui atlikti reikia tik kelių minučių.

ii. Vamzdžių agliutinacijos bandymas naudojamas serumo antikūnų prieš mikrobą kiekiui nustatyti nuosekliai praskiedžiant serumą ir sumaišant praskiestus serumus su pastoviu mikrobinių antigenų kiekiu. Po atitinkamo inkubavimo didžiausias serumo tirpalas, rodantis matomą agliutinaciją, laikomas serumo titru (pvz., Widal vamzdžių bandymas, Brucella vamzdžio bandymas). Titras atspindi antikūnų koncentraciją serume; didesnis titras, daugiau yra antikūnų koncentracija.

Atliekant pirminius atrankos testus, naudojami stikliniai testai, skirti nustatyti serumo antikūnus nuo infekcinių medžiagų. Teigiamų skaidrių bandymų serumai turėtų būti pakartotinai išbandyti mėgintuvėliuose, kad būtų patvirtinti skaidrių bandymų rezultatai. Skaidrių bandymas gali duoti klaidinančių rezultatų, ypač esant labai aukštam antikūnų kiekiui serume (pvz., Prozono reiškinys su brucelos antikūnais).

Agliutinacijos bandymo sistemose yra daug vidinio variabilumo. Taigi, kai paciento serumo titerio vertės tikrinamos dviem atvejais, skirtumas tarp titro reikšmių yra reikšmingas tik tada, kai titro reikšmės skiriasi bent dviem dvigubais praskiedimais [arba dviejų vamzdžių skirtumu (keturis kartus pirmosios vertės) ] (pvz., „Widal Tube“ bandyme serumas yra atskiedžiamas dviem raukšlėmis: 1 iš 20, 1 iš 40, 1 80, 1 iš 160, 1 iš 320 ir 1 iš 640. Jei pacientas turi pirmąjį Widal testą 1 titras iš 160, antrasis „Widal test“ titras yra reikšmingas, jei jis yra 1 iš 640 arba daugiau kaip 1 iš 640.)

Heterofilinių antikūnų tyrimas:

(Dažnai vadinamas monokontroliniu bandymu) Heterofilinių antikūnų tyrimas yra hemagliutinacijos tyrimas, skirtas aptikti antikūnus prieš Epstein Barr (EB) virusą, sukeliantį infekcinę mononukleozės ligą. Infekcinės mononukleozės metu susidarę IgM antikūnai kryžmiškai reaguoja su arklių RBC paviršiaus antigenais (greičiausiai dėl EB viruso ir arklių RBC paviršiaus baltymų antigeninio panašumo) ir sukelia hemaglutinaciją.

Netiesioginis (pasyvus) agliutinacijos testas:

Netiesioginio agliutinacijos teste žinomi tirpūs antigenai yra padengti ant kitų ląstelių (pvz., Avių ar kalakutų eritrocitų) arba inertinių dalelių (pvz., Latekso, bentonito, anglies, polistireno), kurie veikia kaip pasyvūs antigenų nešikliai.

Daugelis antigenų gali būti padengti ant eritrocitų tiesiogiai arba po to, kai eritrocitai apdorojami formalinu, tanino rūgštimi arba glutaraldeliu. Naudojant eritrocitus dengimui, privalumai yra jų lengvai pasiekiami ir saugomi. Be to, šie testai yra labai jautrūs.

Tiriamasis serumas sumaišomas su žinomais antigenais dengtais eritrocitais arba lateksu.

↓

Jei bandymo serume yra antikūnų, eritrocitai ar latekso dalelės agliutinuoja ir sukuria matomus gumbus.

Hemagliutinacijos tyrimas:

Hemagliutinacijos testai yra paprasti ir lengvai atlikti. Tiek kokybinius, tiek kiekybinius tyrimus galima atlikti naudojant hemagliutinacijos metodą.

Bandomasis serumas nuosekliai praskiedžiamas skiediklio tirpalu mikrotitravimo plokštelių šuliniuose.

↓

RBC, padengtos žinomu antigenu, pridedami vienodais kiekiais su visais šuliniais. Naudojama tinkama teigiama kontrolė, neigiama kontrolė ir reagento kontrolė. Plokštelė gerai suplakti ir inkubuojama vietoje, kurioje nėra vibracijų.

↓

Po inkubacijos plokštelė yra skaitoma plika akimi agliutinacijai.

Teigiama reakcija:

Gręžiniai su agliutinacija rodo, kad tiriamojo serumo antigenų apvalkalai yra sujungti su atitinkamais antikūnais. Apibūdinama, kad agliutinuoto šulinio dugnas turi kilimų išvaizdą.

Neigiama reakcija:

Šuliniuose, kuriuose nėra antigenų antikūnų, nėra RBC agliutinacijos. Dėl gravitacijos RBC nusileidžia į gręžinių dugną ir suteikia „mygtuką“ kaip išvaizdą, kur „mygtuko“ kraštas yra aštrus ir reguliarus.

Tiriamojo serumo antikūnų titras:

Serumo praskiedimas, kuris suteikia 50 proc. Agliutinacijos, palyginti su gerai rodomu pilnu (100 proc.) Agliutinacija, yra tiriamojo serumo antikūnų titras. Hemagliutinacijos rinkiniai skirti antikūnų aptikimui nuo hepatito B viruso, ŽIV, tiroglobulino ir kt.

Želatinos dalelių agliutinacija:

Dalelių agliutinacijos bandymuose želatinos dalelės yra alternatyvios eritrocitams. Specialios želatinos dalelės (apie 3 µm skersmens) turi labai hidrofilinį paviršių, todėl nėra specifinio medžiagos, esančios bandinyje, nesiejančios. Želatinos dalelės gaminamos fazių atskyrimu ir trijų dimensijų kryžminimu 40 ° C temperatūroje. Gautos dalelės fiksuojamos formaldehidu arba gluteraldehidu.

Želatinos dalelės neturi antigeniškumo, todėl jos neturi problemų, susijusių su hemagliutinacijos tyrimais (pvz., Heterofiliniais antikūnais, kurie gali nespecifiškai reaguoti su RBC ir pateikti klaidingus teigiamus agliutinacijas hemagliutinacijos tyrimuose).

Latekso agliutinacijos tyrimas:

Be eritrocitų ir želatinos, antigenų gabenimui ant jų paviršiaus gali būti naudojamos tik kelios kitos dalelės. Tokios antigenomis padengtos dalelės maišosi su specifiniais antikūnais. Baltymų ir polisacharidų antigenai gali būti padengti latekso dalelėmis. Šios antigenų padengtos dalelės agliutinuotos, kai yra antikūnų.

Atvirkštinis pasyvus hemagliutinacijos tyrimas:

Atvirkštiniuose pasyviuose hemagliutinacijos tyrimuose RBC yra padengti žinomais antikūnais. Šie rinkiniai naudojami antigenams aptikti bandomuosiuose mėginiuose, pvz., HBs Ag serume.

„Rose-Waaller“ testas:

Tai yra pasyvus hemagliutinacijos testas reumatoidiniam faktoriui nustatyti. Vienas iš žmogaus reumatoidinio faktoriaus bruožų yra tas, kad jis gali jungtis su žmogaus IgG ir triušio IgG. Avių eritrocitai yra padengiami anti-avių IgG antikūnų subagliutinuojančiais kiekiais. Reumatoidiniai veiksniai agliutina avių eritrocitus, padengtus triušio anti-avių IgG.

Flokuliacijos bandymas:

Flokuliacija yra dar vienas antigenų-antikūnų komplekso susidarymo tyrimo tipas, naudojamas antikūnų aptikimui ir kiekybiniam nustatymui. Priešingai nei agliutinacija ir nusodinimas (kai antigenų-antikūnų kompleksai nusėda iki mėgintuvėlio dugno), flokuliacijos bandyme antigenų antikūnų kompleksai užpildo ir lieka suspensijoje kaip flokuliai, o rezultatai skaitomi mikroskopu. Šis metodas naudojamas atliekant VDRL testą (venerinių ligų tyrimo laboratorinį tyrimą), siekiant nustatyti antikūnus prieš Treponema pallidum, sifilį sukeliančias bakterijas.

Virusinė hemagliutinacija:

Virusinė hemagliutinacija yra ypatinga eritrocitų agliutinacijos kategorija, kuri neapima antigenų antikūnų reakcijos. Tam tikri virusai prisijungia prie RBC paviršiaus baltymų, o šis surišimas sukelia spontanišką RBC agliutinaciją.

Specifiniais antivirusiniais antikūnais galima išvengti spontaniško RBC agliutinacijos viruso. Antikūnai prieš virusą prisijungia prie viruso paviršiaus antigenų ir užkerta kelią viruso ir RBC sąveikai, todėl RBC nėra agliutinuojami. Jis vadinamas virusiniu hemagliutinacijos slopinimo tyrimu ir naudojamas virusinių antikūnų kiekiui nustatyti serumo serume.

Šalto agliutininų bandymas:

Tam tikros infekcijos (ypač Mycoplasma pneumoniae) ir autoimuninių ligų metu susidarantys antikūnai turi ypatingą gebėjimą agliutinuoti RBC 4 ° C temperatūroje. Šie antikūnai vadinami šaltais agliutininais.

Paciento serumo praskiedimai yra inkubuojami 1% RBC 4 ° C temperatūroje per naktį.

↓

Vamzdžiai tiriami dėl agliutinacijos buvimo. Jei yra agliutinacija, mėgintuvėliai pakartotinai inkubuojami 37 ° C temperatūroje.

↓

RBC deagliutinacija 37 ° C temperatūroje rodo, kad serume yra šaltų agliutininų. Mycoplasma pneumoniae infekcijai diagnozuoti naudojamas šaltas agliutinino tyrimas. 50–80 procentų ūminių Mycoplasma pneumoniae infekuotų pacientų turi šaltą agglutininą, priklausantį IgM tipui.