Tyrimo pastabos dėl išankstinio srauto citometrijos

Toliau minėtame straipsnyje pateikiami tyrimo srauto citometrijos tyrimai.

Srauto citometrija yra naujausia technika, sukurta per pastaruosius du dešimtmečius, norint ištirti ląstelių turinį, ypač branduolinio pakavimo efektyvumą. Be NPE, galima tinkamai analizuoti įvairių ląstelių turinio fizines ir chemines savybes bei patologines sąlygas.

Srauto citometrai rinkoje yra įrenginiai. Mašina susideda iš skysčių sistemos, optinės sistemos, skirtos surinkti šviesos signalus, generuojamus ląstelėmis per lazerį. Įrenginys taip pat yra aprūpintas elektronine sistema, kuri konvertuoja šviesos signalus į proporcingus elektroninius signalus, kurie galiausiai skaitmeninami kompiuterinei analizei.

Galima nuskaityti apie 5000 ląstelių per sekundę, matuojant atskirai vienas po kito, iš heterogeninės populiacijos suspensijos.

Sudėtinga, suprojektuota „Fludics“ sistema yra aprūpinta lazeriais, optika, elektronika ir rūšiavimu. Fludics sistema turi fluorescencinę aktyvintąją ląstelių rūšiavimo sistemą (FACS Calibur skysčių sistema), o rūšiavimo metu ji gali rūšiuoti vieno ląstelių skaičiaus tikslumą.

Rezultatas yra aukštas grynumas, o atkūrimas patenka tarp vieno langelio ir atkūrimo. Jis elektroniniu būdu valdomas trimis mygtukais, kad pasirinktumėte PRIME, STAND BY ir RUN režimus. Ši norma yra kontrolė kaip Aukšta; (60ul / min.), Vidutinė (35 ul / min) ir maža (12 ul / min).

Svarbi įrangos dalis yra sužadinimas ir emisija, fluorochromai, filtrai ir spalvų kompensavimas. 530/30 BP filtras matuoja fluorescencinio izotiocianato (dėmių) skleidžiamus signalus. Jei naudojamas Phoerytrin ir Popidium Iodide, naudojamas 585/42 BP filtras. Naudojami 650 LP filtrai, jei generuojamas Peridinino chlorofilas ir 7-amino-aktinomicinas D signalas.

Lazeriniai signalai skaitomi Becton Dickinson ląstelių paieškos programine įranga. Florescentiniai detektoriai ir juostų filtrai turi būti koreguojami pagal prietaiso nurodymus ir reikalavimus. 488 nm Argono lazerio šviesos šaltiniai ir 623 nm juostos pralaidumo filtras paprastai yra įrenginiuose.

Ji taip pat turi duomenų ir analizės rodymo sistemą. Svarbūs parametrai yra histogramos, kelių parametrų duomenys ir sąrašo režimo duomenys ir vartai. Duomenų mašininė analizė teikiama naudojant programinę įrangą ir pateikiamos DNR turinio histogramos, palyginti su skaičiumi, kurios automatiškai rodomos kompiuteryje (49.2).

Srauto citometro taikymas yra daug ir yra biologinis tyrimas ir klinikiniai tyrimai daugelyje žmonių ligų. Srauto citometras yra naudojamas kraujo linijų tyrimui hemopoitinio audinio oro kvėpavimo žuvų galvos inkstų ląstelėse.

Gali būti lengva atskirti pluripotentinę kraujodaros kamieninę ląstelę ir brandaus funkcinio, periferinio limfocitų populiacijos fenotipą. Svarbus šios įrangos naudojimas yra apoptozės ar ląstelių mirties tyrimas ir ląstelių nekrozės tyrimas dėl toksinio poveikio pesticidams.

Dėl plačiakampių sklaidos signalų galima išspręsti limfocitus, monocitus ir granulocitus iš lizuoto viso kraujo mėginio. Taip pat galima atskirti trombocitus nuo fono triukšmo. Jis naudojamas imuninei sistemai ir imunofenotipui nustatyti. Jis naudojamas leukemijos ir limfomos tyrimams, transplantacijos tyrimams, retikulocitų skaičiavimui ir ląstelių DNR kiekio analizei.

Dėl impulso apdorojimo mechanizmo jis yra naudingas DNR ląstelių ciklo analizėje. NPE analizė naudojama išskirti pirminį krūties vėžį ir metastazę, pirminį gaubtinės žarnos vėžį ir storosios žarnos metastazę, taip pat skrandžio ir kiaušidžių vėžį (49.2 pav.).

Taikomas protokolas, kad pirmosios ląstelės buvo pašalintos ir fiksuotos 3% paraformaldehido. Jie permeabiliuoti 0, 5% Triton x 100. Po to, kai buvo apdorotas ciklas Test Plus DNR, branduolinė DNR buvo pažymėta popidžio jodidu po gydymo RNase.