Klinikinis Coomb testo aktualumas (antiglobulino testas)
Coombs testas yra paprastas ir sumanus metodas. Pirmą kartą Coombs testą 1908 m. Aprašė Moreschi, o vėliau 1945 m. RR Coombs ir bendradarbiai iš naujo atrado, kad demonstruotų raudonųjų kraujo kūnelių antigenų antikūnus.
(Antikūnai vadinami „ne agliutinuojančiais“ antikūnais, nes antikūnai, nepaisant jų prisijungimo prie antigenų RBC, nesukelia agliutinacijos, o antikūnai kartais vadinami „neišsamiais antikūnais“, nes antikūnai nesukelia Tačiau antikūnų molekulės struktūroje nėra neišsamumo.)
Ne agliutinuojantys antikūnai faktiškai jungiasi prie antigenų ant RBC paviršiaus. Tačiau laukiamas RBC agliutinacija nepasireiškia. Kai pridedamas kitas antikūnas (vadinamas anti-antikūnu arba antiglobulinu) prieš RBC surištą antikūną, atsiranda agliutinacija. Antiantikūnai jungiasi prie RBC surištų antikūnų Fc regionų ir sudaro tinklelį, kuris veda prie agliutinacijos. Bandymas vadinamas antiglobulino arba Coombs testu.
Yra dviejų tipų anti-globulino testai:
1. Tiesioginis anti-globulino testas (DAT)
2. Netiesioginis anti-globulino testas (LAT)
1. Tiesioginis anti-globulino testas (DAT) naudojamas antikūnams, kurie in vivo yra susiję su RBC, aptikti.
Nuplauti RBC iš paciento maišomi su anti-globulinu.
↓
Anti-globulinai jungiasi prie neregliuojančių antikūnų ant RBC paviršiaus ir sukelia matomą agliutinaciją. Bandymo rezultatas yra teigiamas DAT (16.6 pav.).
Todėl teigiamas DAT rodo, kad paciento RBC yra padengti ne agliutinuojančiais antikūnais, o pacientas yra teigiamas DAT.
i. Teigiamas DAT atsiranda naujagimių RBC, kurių naujagimio hemolizinė liga yra (HDN RBC yra padengtos anti-Rh antikūnais).
ii. Šiuo metu DAT naudojamas aptikti IgG antikūnus ir C3b, prijungtus prie RBC paviršiaus. Pacientams, kuriems pasireiškia hemolizė, DAT testas yra naudingas nustatant, ar hemolizė yra imuninė, ar ne.
16.6 pav.: Koombo tiesioginis agliutinacijos testas (DAT).
DAT yra naudojamas aptikti ne agliutinuojančius antikūnus, prijungtus prie RBC paviršiaus. A. Asmenų plaunami RBC yra sumaišyti su anti-globulino reagentu. Anti-globulinai prisijungia prie RBC surištų antikūnų Fc regionų ir sukelia matomą agliutinaciją, o individas yra teigiamas DAT. B. Jei RBC nėra padengtos antikūnais, nebus agliutinacijos, o individas yra neigiamas. DAT taip pat naudojamas aptikti naujagimio anti-Rh antikūnų padengtų RBC buvimą, galinčius patirti naujagimio hemolizinę ligą.
i. Neimuninės hemolizės priežastys [pvz., Skleidžiama intravaskulinė koaguliacija, raudonųjų kraujo kūnelių fermentų trūkumas (pvz., Gliukozės-6-fosfato dehidrogenazės trūkumas (G6PD trūkumas), raudonųjų ląstelių membranos defektai (pvz., Paveldima sferocitozė, PNH) ir hemoglobinopatijos (pvz. pjautuvo ląstelių anemija, talasemija)] yra neigiami.
ii. Hemolizės imuninės priežastys (pvz., Autoimuninė hemolizinė anemija, vaistų sukelta hemolizė, hemolizinės transfuzijos reakcijos) yra teigiami.
iii. Pacientams, sergantiems šaltais autoantikūnais, paroksizmatu šaltu hemoglobinurėja, ir kai kuriais atvejais dėl hemolizinių anemijų, pasireiškia teigiamas C3, kurį sukėlė vien C3.
2. Netiesioginio agliutinacijos testas (IAT) naudojamas nustatant nesusijusius antikūnus prieš RBC paciento serume.
i. IAT, skirtas aptikti anti-Rh antikūnus motinos serume:
Motinos serumas inkubuojamas su Rh teigiamu O kraujo grupės RBC. Jei motinos serume yra anti-Rh antikūnų, antikūnai prisijungs prie RBC. RBC yra nuplaunami.
↓
Tada pridedamas anti-globulino reagentas.
↓
Jei motinos serume yra anti-Rh antikūnų, RBC būtų agliutinuoti ir bandymas yra teigiamas IAT.
ii. IAT, siekiant nustatyti antikūnų kiekį recipiento serume prieš donoro RBC kraujo perpylimo metu:
IAT testas yra plačiai naudojamas (prieš kraujo perpylimą) kryžminiame donoro RBC ir gavėjo serumo derinyje, siekiant nustatyti antikūnų buvimą recipiente, kuris gali reaguoti su donoro RBC.
Nuplaukite donoro RBC.
↓
Į RBC įpilkite recipiento serumą ir 30 minučių inkubuokite 37 ° C temperatūroje.
↓
Nuplaukite RBC.
↓
Pridėti anti-globulino reagentą.
Agliutinacijos raida rodo, kad recipiento serume yra antikūnų prieš donorų RBC, o bandymas teigiamas kaip antikūnų. Teigiamas IAT rezultatas rodo, kad siūlomas donoro kraujas neturėtų būti pernešamas į atitinkamą gavėją.
Dabartiniai anti-globulino bandymo reagentai (taip pat vadinami Coombs'o reagentais) turi monokloninių antikūnų, nukreiptų prieš žmogaus IgG ir C3b, kokteilį (ne agliutinuojančių antikūnų susiejimas su RBC aktyvina komplemento sistemą, dėl kurios C3b fragmentai nusodinami per RBC, todėl, be antikūnų, RBC taip pat yra padengtos C3b fragmentais).
